Determination of the content of pregabalin gastric retention sustained- release tablets and influence of high viscosity excipients on the determination results
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摘要:
建立普瑞巴林胃滞留缓释片含量测定的高效液相色谱法（HPLC），采用一种特殊的样品前处理方式成功解决了普瑞巴林回收率低的难题。通过比较盐析法和辅料分散法，建立了克服供试品溶液黏稠的前处理方法。两种前处理方法均可用于本品的含量测定，但盐析法简便易行。采用的HPLC条件为Inertsil ODS-3（4.6 mm×0.25 m，5 µm）色谱柱，流动相3.4 g/L磷酸二氢钾（氨水调pH至6.3）-甲醇（85︰15），柱温30 ℃，流速1.0 mL/min，进样量50 µL，检测波长210 nm。盐析法方法学验证结果显示，制剂中普瑞巴林平均回收率为99.74%，RSD为0.43%；精密度试验的RSD为0.77%；供试品溶液12 h内稳定，色谱系统耐用性良好，辅料不干扰含量检测。本研究建立的测定方法稳定、可靠，适用于普瑞巴林胃滞留缓释片的含量测定。
Abstract:A high-performance liquid chromatographic (HPLC) method for the assay of pregabalin gastric retention sustained-release tablets was established, successfully solving the problem of low recovery of pregabalin through a special sample pretreatment method. By comparing salting-out and excipient dispersion, the pretreatment methods to overcome the viscosity of the test solution were established. Both methods can be used for the determination of the product content, but the salting-out method is easier to operate. The HPLC conditions were Inertsil ODS-3 (4.6 mm×0.25 m, 5 µm) column with mobile phase of 3.4 g/L potassium dihydrogen phosphate (pH adjusted to 6.3 by ammonia) and methanol (85︰15);the column temperature was 30 ℃;the flow rate was 1.0 mL/min;the sample size was 50 µL;and the detection wavelength was 210 nm. Through the validation of the salting-out method, the average recovery of the drug was 99.74% and the RSD was 0.43%; the precision test RSD was 0.77%;the test solution was stable within 12 h;the chromatographic system had good durability;and the excipient did not interfere with the content detection.The method is stable, reliable and suitable for the assay of pregabalin gastric retention sustained release tablets.
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慢性炎症反应是众多威胁人类健康疾病的共同发病机制，包括癌症、心血管疾病、类风湿性关节炎和神经退行性疾病等。炎症反应诱发的细胞因子风暴也是导致COVID-19患者病情恶化甚至死亡的重要原因[1−2]。流行病学研究显示，近30年间全球有大约36亿人患有慢性炎症性疾病。
研究发现，前列腺素（prostaglandins, PGs）的生物合成在炎症反应中发挥重要作用。在各类前列腺素中，PGE2（prostaglandin E2, PGE2）被认为是参与炎症反应的最重要脂质介质，传统的非甾体抗炎药（non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs）即主要针对PGE2合成上游途径的环氧合酶-1/2（cyclooxygenases, COX-1/2）而设计，在全球被广泛用于各类炎症性疾病的治疗和发热疼痛症状的缓解。然而长期的临床使用发现包括阿司匹林、消炎痛、布洛芬在内的几乎所有经典的NSAIDs均能引起包括胃肠道[3]和心血管[4]等在内的严重临床不良反应。
微粒体前列腺素E2合酶-1（microsomal prostaglandin E2 synthase-1, mPGES-1）是目前发现的唯一可诱导的介导促炎型PGE2产生的终末合成酶[5]，对其靶向性抑制可只减少抑制PGE2的合成而不抑制其他前列腺素的产生，因此被认为可保留非甾体抗炎药的临床益处，且心血管风险较低，在控制炎症相关疾病中可能具有更好的特异性和更高的安全性，因此mPGES-1的选择性抑制剂有望成为新一代NSAIDs开发的新方向。本文总结了mPGES-1分子在多种炎症和心血管疾病中的作用，并对mPGES-1靶向抑制剂的研究现状及其在不同动物模型和炎性疾病中的治疗作用进行综述，为后续抗炎药物的研发提供借鉴和新思路。
1. mPGES-1在炎症和心血管疾病中的作用
大量研究表明mPGES-1参与了多种炎性相关疾病进程。如，在关节炎、疼痛研究方面，mPGES-1在胶原诱导的小鼠模型和角叉菜胶诱导的大鼠模型的炎症发生部位均表达增加。敲除mPGES-1能明显改善胶原抗体诱导的小鼠关节炎模型的炎症和疼痛反应，抑制血管翳形成和关节侵蚀，使病变程度减轻。mPGES-1也在骨关节炎患者的软骨和滑膜组织中表达，在促炎因子诱导的体外软骨细胞中也表达增加[6]。在骨关节炎患者的脂肪组织中异常表达的mPGES-1可能促进髌下脂肪垫的形成，从而参与和影响骨关节炎的进程。除此之外，在免疫诱导的小鼠发热过程中mPGES-1也发挥了重要作用，研究表明mPGES-1缺失可明显减少LPS注射所引起的野生型小鼠PGE2的产生，改善并缓解发热症状。另外，mPGES-1也参与肿瘤的发生和疾病进程。有研究发现，在体外癌细胞中敲减mPGES-1可延缓肿瘤的生长和增殖速度[7]。小鼠缺失mPGES-1可使肿瘤相关巨噬细胞向M1型极化，减少血管生成和肿瘤转移，从而延缓肿瘤的发病进程。因此抑制mPGES-1可望作为肿瘤的辅助治疗方式，通过多种免疫调节机制发挥抗癌作用[8]。此外，mPGES-1还参与神经炎症疾病[9−10]、肝脏缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）损伤、巨结肠病、肌腱疾病等多种炎性相关疾病，并在术后疼痛缓解中发挥重要作用[11]。
在心血管病研究方面，与选择性抑制COX-2的NSAIDs相比，选择性抑制mPGES-1不仅可能降低心血管事件的发生风险，甚至可望延缓许多炎症性心血管疾病的进程。比如，mPGES-1可能通过诱导PGE2的产生上调巨噬细胞中的基质金属蛋白酶-2/9的表达水平，加重动脉粥样硬化斑块的不稳定性。其也可能通过抑制铁死亡参与脑I/R损伤[12]。研究进一步发现，敲除mPGES-1，尤其是巨噬细胞选择性敲除，则可有效缓解动脉粥样硬化，减轻血管损伤反应，减少动脉瘤的发生[13−14]，降低应激后的心脏损伤，并增加心肌梗死后的存活率[15]。此外，敲除mPGES-1还可通过增加PGI2的水平从而抑制动脉血栓的形成。敲除mPGES-1也可以减轻肥胖和肥胖相关的心血管损伤。由于实验小鼠的基因背景的差异，mPGES-1在血压调节中的作用研究结果尚不完全统一，但2022年Steinmetz-Späh等[16]报道，mPGES-1抑制剂可以显著降低终末期肾衰病患者的外周血管阻力，为mPGES-1抑制剂在临床高血压患者中的潜在应用提供了支持。综上，尽管有报道认为mPGES-1敲除可能会加重心肌梗死或I/R损伤后的梗死面积[17]，但综合分析本课题组认为，靶向性抑制mPGES-1，尤其针对巨噬细胞mPGES-1的选择性抑制，在心血管疾病患者中的应用安全性预期较高，可望成为新型NSAIDs开发的强有力靶点。尽管目前针对如何将mPGES-1抑制剂靶向性输送到炎症局部的巨噬细胞，而对其他组织或细胞不产生影响仍是一大挑战，但有文献表明一种可注射的重组高密度脂蛋白纳米颗粒载体已成功地将他汀类药物特异地输送到动脉粥样斑块局部的巨噬细胞，且达到了良好的治疗效果[18]。因此，有理由相信NSAIDs巨噬细胞靶向给药的技术瓶颈也有望突破。
2. mPGES-1抑制剂的种类及研究现状
至今，全球各实验室利用不同的实验方法，共设计和报道了超过
1000 种潜在的mPGES-1抑制剂，综合看来，主要分为通过化学手段合成和改造的合成型抑制剂和从天然植物、药物中提取分离得到的天然衍生物抑制剂两大类。2.1 合成型抑制剂
许多不同结构的化合物均在体内和/或体外对mPGES-1具有抑制作用[19]，尽管与之相关的综述性文献并不缺乏，但在体研究的系统性整理此前并无详细报道。本文按照化学分类，将各类合成型mPGES-1抑制剂的在体研究结果进行了系统性梳理。
2.1.1 菲咪唑类
MF63是第1个报道的对mPGES-1具有良好抑制活性的mPGES-1抑制剂，能选择性抑制人的mPGES-1，并在人全血检测（human whole blood assay, HWB）中抑制PGE2的生成。对豚鼠和人源化mPGES-1敲入小鼠的研究发现该化合物能选择性地抑制PGE2的合成，减轻脂多糖诱导的发热和碘乙酸引起的骨关节炎疼痛，且不抑制其他种类前列腺素的合成，不产生胃肠道副反应；但其在血栓素B2 和 LPS诱导的人源化mPGES-1敲入小鼠的痛觉过敏中无显著改善作用。临床研究发现，MF63处理可提高EGFR抑制剂厄洛替尼（erlotinib）在体内外治疗前列腺癌的作用效果[20]。另外，菲咪唑衍生物化合物1和化合物2也被证明能够有效抑制mPGES-1的表达，具有更好的选择性和热稳定性，且能显著提高豚鼠痛觉过敏模型的口服疗效。但之后关于此类mPGES-1抑制剂的研究没有后续报道。
2.1.2 苯并咪唑类
Muthukaman等[21]发现一些二噁烷融合的三环苯并[d]咪唑衍生物，如化合物3能有效抑制人mPGES-1的酶活性，具有良好的选择性、代谢稳定性和合理的口服药代动力学，可显著减轻LPS诱导的热痛模型所引起的痛觉过敏反应。进一步合成的一系列呋喃融合的三环苯并[d]咪唑类似物，化合物4和化合物5也同样具有mPGES-1酶的抑制作用。化合物5还具有很高的脑穿透率，在大鼠、豚鼠、狗和食蟹猴上均有较好的药代动力学数据，以及较高的口服生物利用度[22]。一些由化合物5衍生的化合物，化合物6等经实验鉴定后发现其同样具有良好的药代动力学特征、足够的中枢神经系统穿透性和较高的口服生物利用度，且化合物6对脂多糖诱导的豚鼠急性疼痛和谷氨酸钠碘乙酸诱导的豚鼠骨痛有较好的治疗作用，有望进入临床试验[23]。化合物7也属于苯并咪唑类化合物，研究显示其能够剂量依赖性地抑制人mPGES-1的酶活性，抑制A549细胞中PGE2的合成，且对重组大鼠mPGES-1同样具有抑制作用，能显著减少LPS刺激下腹腔巨噬细胞中PGE2的生成。而且在air-pouch诱导的急性炎症性小鼠模型中，它可以选择性地阻断PGE2的生成而不影响TXB2和PGI2的稳定代谢产物6-keto PGF1α的生成。临床研究也发现，化合物7能显著抑制去甲肾上腺素引起的冠状动脉搭桥手术患者的内乳动脉和隐静脉的血管收缩，而IP受体拮抗剂（CAY10441）和COX-2抑制剂（dup-697）则加重上述改变。此外，化合物7处理可减少异种移植和转基因小鼠模型中神经母细胞瘤的肿瘤样增殖，还能通过使A549肺癌细胞的蛋白表达谱向死亡状态转变，从而抑制癌细胞增殖[24]。其还可通过调节CX3CL1的表达参与急性炎症的消退过程[25]。在肝脏I/R损伤研究中发现mPGES-1的表达在中性粒细胞和Kupffer细胞中显著增加，同时PGE2的合成也明显增多。化合物7的处理能显著改善肝脏I/R损伤，减轻肝脏炎症、坏死和氧化应激水平，促进损伤后肝脏的修复。化合物7还能显著减少病变肌腱基质细胞和正常肌腱基质细胞中PGE2的生成，同时使病变肌腱细胞中6-keto-PGF1α的生成增加，从而在肌腱疾病中发挥保护作用[26]。由其衍生出的化合物8等同样在酶活性实验、A549细胞实验和HWB实验中证实能有效抑制mPGES-1的活性，且对绵羊COX-1和人重组COX-2无抑制作用，并能在小鼠气囊模型中减少PGE2的表达，改善角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀[27]。
2.1.3 吲哚羧酸类
研究人员发现mPGES-1与5-LOX激活蛋白（5-lipoxygenase-activating protein, FLAP）具有同源性和相似性。因此发现FLAP抑制剂MK886对mPGES-1同样具有抑制功能，且能通过抑制mPGES-1/PGE2调节EP2受体与actin相关蛋白-2/3（ actin-related proteins-2/3, ARP2/3）的表达水平，逆转细胞的异常表达和功能损伤[28]。临床研究发现，mPGES-1和PGE2诱导的炎症也在巨结肠症（hirschsprung disease, HSCR）中发挥重要作用，PGE2能破坏细胞骨架并抑制细胞迁移，使用MK886处理能部分逆转受损的细胞形态，使功能得到部分恢复。通过对MK886的进一步改进，继而又合成了苯并[g]吲哚-3-羧酸盐，即化合物9。该化合物能在A549细胞中抑制PGE2的生成，并能在一定程度上减轻大鼠胸膜炎模型和小鼠角叉菜胶诱导的足爪肿胀模型的炎症反应[29]。
2.1.4 昔康类
苯并硫吡喃S-二氧化物对人的mPGES-1具有一定的抑制作用，研究人员通过对其进行改造，发现并鉴定了化合物10，也被称为PF-9184，对人mPGES-1酶活性具有很强的抑制作用。在IL-1β刺激的胎儿成纤维细胞中，PF-9184也表现出良好的mPGES-1选择性，比COX-1/2酶高238倍，且对6-keto-PGF1α、PGF2α和TXB2的产生几乎没有影响[30]。细胞实验表明，PF-9184可降低PGE2水平，且可抑制NF-кB/IкB-α/COX-2/mPGES-1/PPAR-γ的异常表达，并减少大鼠角叉菜胶模型和IL-17刺激的小鼠背侧气囊模型中PGE2的产生[31]。
2.1.5 γ-羟基丁烯内酯类
石油皂苷M（petrosaspongiolide M）含有γ-羟基丁烯内酯的支架结构，可抑制小鼠结肠炎模型的炎症反应，多个PM类似物聚集构成化合物11（BTH）。BTH在LPS刺激的RAW264.7细胞中可显著抑制PGE2的产生。而且在上述细胞和酵母聚糖（zymosan）诱导的小鼠腹膜炎模型中，BTH都仅抑制mPGES-1和PGE2的表达与合成，而对COX-2的表达无影响。BTH还可通过选择性抑制胶原诱导的小鼠关节炎模型和酵母聚糖诱导的小鼠腹膜炎模型中mPGES-1的表达来改善和减轻炎症反应，显著降低关节炎发生率和关节炎评分，减少炎症细胞浸润、软骨侵蚀和蛋白多糖的丢失，同时使PGE2和白三烯B4的水平明显降低[32]。
2.1.6 匹立尼酸类
Koeberle等[33]基于匹立尼酸（pirinixic acid, PA）的结构得到了一系列α替代型衍生物，具有mPGES-1和5-LOX双抑制活性。其中化合物12具有很强的mPGES-1和5-LOX 抑制能力，并能在细胞中抑制PGE2的生成，且不对COX-1/2产生抑制作用。YS121也是一类α替代型匹立尼酸衍生物，在LPS刺激的人全血实验中可浓度依赖地抑制PGE2的合成，且在卡拉胶诱导的大鼠胸膜炎模型中显著抑制渗出物的形成和减少炎性细胞浸润。此外，化合物13也是一类α-萘基匹立尼酸衍生物，对mPGES-1和5-LOX具有较强的选择性抑制作用，在LPS刺激的人全血实验中抑制PGE2的表达，而不影响PGI2和TXB2的表达[34]。此外，化合物13在大鼠和狗体内都有良好的药代动力学表现。虽然部分上述抑制剂已在动物模型中得到证明，但它们在人体内的具体疗效和潜在不良反应尚不明确。
2.1.7 苯甲酰胺类
AF3485是苯甲酰胺的衍生物，在IL-1β刺激的A549细胞中能通过选择性地抑制mPGES-1显著减少PGE2的形成。体外研究显示，AF3485能通过降低表皮生长因子受体和血管内皮生长因子的表达，减少小鼠皮肤癌细胞A431的异常增殖[35]，但目前尚没有该化合物相关的体内研究。AF3442在LPS诱导的单核细胞中能够抑制mPGES-1的活性和PGE2的生成，在人全血实验中显著抑制PGE2的产生，而几乎不影响其他前列腺素合成酶的表达水平。此类化合物仍需要进一步的体内实验对其疗效和毒性进行深入研究。
2.1.8 苯基磺酰肼类
通过高通量药物筛选策略，研究人员发现具有苯基磺酰肼核心的化合物14能够通过抑制mPGES-1在LPS刺激的巨噬细胞中抑制PGE2的产生[36]。通过对化合物14构效关系的进一步研究，发现化合物15对mPGES-1具有较强的抑制作用且能减少LPS诱导的PGE2的产生。进一步发现，化合物16后被命名为PBCH，可显著抑制RAW264.7巨噬细胞和A549细胞中PGE2的生成，并在人全血实验中同样具有PGE2的抑制作用[37]。动物实验也发现PBCH能通过降低淋巴细胞抗原6家族成员G6D （lymphocyte antigen 6 family member G6D, Ly6g6d）的mRNA水平、类风湿因子（rheumatoid factor, RF）的水平以及核因子κb配体的受体激活剂（receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand, RANKL）与骨保护素（osteoprotegerin, OPG）比值，减轻大鼠佐剂性关节炎和卡拉胶刺激所引起的足爪肿胀，且在肝、肾及胃肠道方面无明显不良反应[37]。另外，MPO-0186是一类最近发现的n-氨基苯基磺酰胺化合物，能选择性地有效抑制mPGES-1的表达，在IL-1β刺激的A549细胞中对PGE2和PGI2都有一定的抑制作用[38]。
2.1.9 其他种类化合物
除上述各类化合物外，还有很多通过虚拟筛选策略得到的其他骨架的化合物，同样具有mPGES-1的抑制作用。如从MF63衍生的化合物17同样能够抑制人mPGES-1的活性，对COX-1/2无抑制作用，它能够减少PGE2的释放从而降低小鼠气囊炎症模型（air-pouch）所引起的炎症反应，且最新的研究显示其能阻断血管紧张素Ⅱ小鼠模型中腹主动脉瘤的疾病进展[39]。另外，7-羟基-1-甲基吲哚-3-乙腈（HMIA）能通过抑制mPGES-1 mRNA的稳定性减少LPS诱导的RAW 264.7细胞中PGE2的产生，并减轻角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀[40]。另外还有化合物18、化合物19、化合物20等，均具有一定的mPGES-1抑制作用。综上，通过虚拟筛选手段能够有效获取多种新型mPGES-1抑制剂，但所获得化合物的抑制潜力和临床表现仍有待进一步验证和评价。
2.2 天然型抑制剂
对传统中药和植物药物进行筛选时也发现，许多具有抗炎作用的中药和植物药物都具有mPGES-1的抑制作用，本文按提取物分类将各类天然型mPGES-1抑制剂进行了整理。
2.2.1 酚类提取物
从姜黄中分离得到的酸性多酚化合物姜黄素（curcumin）能中度抑制mPGES-1的表达，通过对其进行细微的化学修饰得到的部分姜黄素戊烯基衍生物也具有明显的mPGES-1抑制作用。此外，一种从绿茶中提取的多酚成分儿茶素-3-没食子酸盐（epigallocatechin-3-gallate, EGCG），经人全血实验测定证实可有效减少mPGES-1和PGE2的生成，且不影响人源COX-2的产生[41]。研究证实，使用EGCG治疗能够降低LPS刺激引起的小鼠骨质中mPGES-1的mRNA的表达和PGE2的产生。从香桃木提取的香桃木醇（myrtucommulone）和贯叶连翘提取的贯叶金丝桃素（hyperforin）也对mPGES-1具有抑制作用，香桃木醇在人全血实验和A549细胞中均能抑制PGE2的产生，且对羊COX-1和人重组COX-2无抑制作用[42]；金丝桃素可通过减少PGE2的表达改善角叉菜胶诱导的小鼠足爪肿胀和大鼠胸膜炎模型引起的炎性症状。另一项研究指出，橄榄油中提取的多酚化合物能在LPS处理的小鼠腹腔巨噬细胞中减少过度表达的mPGES-1、COX-2和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS），从而减轻炎症反应[43]。另外也有研究指出橄榄油中提取的多酚羟基酪醇（hydroxytyrosol）能通过抑制mPGES-1的产生降低PGE2和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达，从而抑制肿瘤的生长和血管的生成[44]。除此之外，橄榄中普遍存在的酚类成分橄榄苦苷（oleuropein）也能通过抑制COX-2/mPGES-1的表达减少IL-1β处理的SW982细胞中NF-κB/IκB-α复合物的解离，从而发挥抗炎和抗氧化作用[45]。另一种存在于石榴皮果实中多酚类提取物石榴皮苷（punicalagin）也能通过调节NF-κB/COX-2/mPGES-1/PGE2通路减轻LPS诱导的小胶质细胞活化，从而减轻神经炎症[46]。
2.2.2 萜类提取物
乳香提取物能通过降低mPGES-1和PGE2的表达，抑制人结肠癌细胞的增殖、血管生成、迁移和凋亡。其中乳香提取的乳香酸（boswellia acids）能降低A549细胞和人全血实验中mPGES-1和PGE2的表达，在卡拉胶诱导的小鼠足肿胀模型和大鼠胸膜炎模型中减轻炎性反应[47]。另一种乳香提取的三萜酸（triterpene acids）也对mPGES-1具有较强的特异性抑制作用。此外，从木耳的根茎和根中分离得到的类倍半萜烯（sesquiterpenoid）也被证实能在大鼠腹腔巨噬细胞和RAW264.7细胞中有效抑制LPS诱导的mPGES-1和PGE2的异常增加[48]。
2.2.3 其他种类提取物
小檗的主要活性成分黄连素（berberine）可剂量依赖性抑制Wistar大鼠气囊模型中PGE2的生成，且对COX-1/2酶活性无影响，小檗碱也对HeLa细胞中 PGE2的生成具有明显的抑制作用。鼠尾草衍生物鼠尾草酚（carnosol, CS）和鼠尾草酸（carnosic acid, CA）也对mPGES-1有较强的抑制作用，但同时对5-LOX也表现出抑制作用。在LPS刺激的人全血实验中，鼠尾草酸抑制PGE2的合成且不抑制其他前列腺素的合成；细胞实验也证实其对COX-1/2活性没有影响。从益母草中提取的益母草碱（leonurine）可通过下调COX-2、mPGES-1和PGE2的水平显著降低尿酸钠单钠晶体（monosodium urate crystal）处理所引起的大鼠关节滑液的炎症反应。酸藤子酚（embelin）是白花酸藤果的活性成分，对mPGES-1具有一定的抑制作用，可浓度依赖地抑制IL-1β作用下A549细胞中PGE2的生成，但同时对5-LOX也有较强的抑制作用。从豆科植物补骨脂中提取的补骨脂二氢黄酮（bavachin）能抑制LPS诱导的小鼠J774巨噬细胞和小鼠腹腔巨噬细胞中mPGES-1/PGE2的产生[49]。此外，还有很多植物源化合物也被鉴定对mPGES-1和PGE2的生成具有抑制作用[50]，但大多数只是在体外评价，很少有进入动物实验。
2.3 mPGES-1抑制剂的临床试验现状
虽然mPGES-1抑制剂已有大量报道，但进入临床试验的只有少数，包括LY3031207/LY3023703、GRC27864以及GS-248。
2.3.1 LY3031207和LY3023703
礼来公司开发的化合物LY3031207以及LY3023703在临床前试验中对mPGES-1具有良好的选择性抑制作用，与塞来昔布相比可明显抑制重组mPGES-1蛋白的活化、减少人全血实验以及A549细胞中PGE2的产生，但不抑制PGI2的形成，也不影响COX-1/2和mPGES-2的功能。在2013年进行的Ⅰ期临床试验中，LY3023703不影响健康受试者体内的PGI2和TXA2的水平，但多次增加LY3031207和LY3023703的剂量可导致药物性肝损伤，可能是它们的活性代谢物与蛋白质共价结合使肝细胞受损并引发超敏反应，由于严重的临床不良反应，与之相关的研究在Ⅰ期临床试验后终止。
2.3.2 GRC27864
格伦马克制药公司开发的GRC27864，也被称为ISC
27864 ，在临床前测试中可有效抑制IL-1β诱导的A549细胞中mPGES-1的激活，也在人、豚鼠和犬全血实验中抑制PGE2的释放，且几乎不抑制COX-1/2和其他前列腺素的生成。在Ⅰ期临床研究中发现GRC27864可以剂量依赖地抑制可诱导型PGE2的产生，对骨关节炎和炎性关节炎有明显的镇痛作用。目前正在进行Ⅱ期临床试验，用于评估中度骨关节炎疼痛患者的疗效和安全性，试验包含624名年龄在40~70岁的男性和女性受试者，为期12周，但试验结果尚未公布[51]。由于在Ⅰ期临床试验中，GRC27864能引起部分受试者产生头晕(6.2%)、头痛(6.2%)和腹泻(6.2%)等不良反应，因此可能限制了其未来的应用和发展。2.3.3 GS-248
GS-248也被称为OX-MPI和BI 1029539。研究表明其能显著抑制人mPGES-1转基因小鼠离体脑毛细血管中mPGES-1的水平。口服GS-248可显著抑制持续癫痫状态下人mPGES-1转基因小鼠大脑中mPGES-1的表达。此外，在人源化mPGES-1基因敲入小鼠中，GS-248在LPS诱导的急性炎症模型和盲肠结扎穿刺诱导的多微生物败血症模型中减少白细胞浸润和肺损伤，使TNF-α、IL-1β和PGE2的水平显著降低，且不抑制PGI2的合成[52]。2020年GS-248的Ⅰ期非随机临床试验在英国完成，第一阶段试验对禁食或喂养状态下单次口服120 mg GS-248脂质胶囊和干粉胶囊的药代动力学、安全性和耐受性进行了分析，GS-248在禁食和饲喂条件下达最大血浆浓度的时间分别为1.5 h和3 h，单剂量GS-248服用后血浆半衰期分别为10和16 h。虽然在Ⅰ期临床试验中未观察到死亡或严重不良事件，但干粉GS-248能引起贫血(7.1%)、胀气(7.1%)、头痛(21.4%)和鼻过敏反应，而且脂质的GS-248在空腹状态下也能导致明显的头痛反应(42.9%)。临床安全事件是现有mPGES-1抑制剂开发的共同难点。另外有些抑制剂虽然进入了临床试验，但却被证明对疾病的治疗存在较大的选择性和局限性[53]。在临床研究中，寻找具有高效抑制功能且潜在风险极低的抗炎药物仍十分具有挑战性。
3. 小结与展望
非甾体类抗炎药物的发现与开发大多基于对前列腺素生物合成的调控，经典的针对环氧合酶COX的抑制剂，包括对COX1/2非选择性NSAIDs抑制剂及COX2选择性抑制剂COXIBs，已被广泛用于多种炎症性疾病的临床治疗，但由于胃肠道和心血管等诸多不良反应，使其在应用上受到很大的限制。究其原因主要是因为上述抑制剂不仅阻断炎症性PGE2的生成，而且也抑制了具有细胞保护功能的PGI2和其他AA代谢产物的形成。因此，NSAIDs的研究靶点逐渐从COXs转为其下游的其他靶点，包括可诱导型PGE2终末合酶mPGES-1，参与PGE2分解的15-羟前列腺素脱氢酶 （15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase, 15-PGDH）以及PGE2的受体EP等。其中，以mPGES-1为靶点的研究最为受到关注。动物实验结果表明，选择性抑制mPGES-1不仅可能保留COX2选择性NSAIDs的抗炎功效，而且心血管风险较低，甚至可望用于治疗某些炎症性心血管疾病，如动脉粥样硬化。虽然越来越多的化合物或天然产物被证明可能通过靶向抑制mPGES-1而减轻炎症反应，然而目前尚无被批准临床使用的mPGES-1抑制剂[54]。除与药物本身的分子结构、理化性质和药代动力学的差异有关外，由于在人和啮齿类动物中mPGES-1的蛋白结构存在一定程度的种属差异，且mPGES-1与其他蛋白如微粒体谷胱甘肽-S-转移酶（microsomal glutathione-S-transferase，GST）-1和蛋白酪氨酸激酶2β（protein tyrosine kinase 2 beta, PTK2B）的结构相似，使多数潜在mPGES-1靶向性抑制剂的临床前期研究也更具挑战性。使用人源化mPGES-1敲入小鼠对现有潜在抑制剂进行体内性能评价，并进一步深入解析mPGES-1在炎症相关疾病中的作用对以mPGES-1为靶点的抗炎药物研发至关重要。
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Figure 1. Comparison of the methods between the KCl salting-out and the PVPP dispersion PEO:Polyethylene oxide;PVPP:Crospovidone
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Figure 2. Chromatograms of excipients solution（A），reference solution of pregabalin（B）and test solution（C）
Table 1 Influence of KCl usage amount and stirring time on the recovery of pregabalin
KCl/g Stirring time/h Reference preparation (Batch DN5398) Homemade preparation (Batch 02204401) Recovery/% RSD/% Recovery/% RSD/% 20 3 100.11 0.23 99.67 0.55 15 3 99.78 0.48 100.26 0.61 10 3 99.42 0.46 99.32 0.49 5 3 96.99 0.87 97.43 0.89 20 2 99.77 0.28 99.90 0.45 15 2 99.19 0.49 99.23 0.32 10 2 99.60 0.41 99.48 0.68 5 2 97.76 0.85 97.52 0.97 20 1 100.20 0.35 99.97 0.56 15 1 99.85 0.46 100.19 0.56 10 1 98.96 0.77 99.89 0.48 5 1 98.02 0.73 97.15 0.95 
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Table 2 Influence of PVPP usage amount and stirring time on the recovery of pregabalin
PVPP/g Stirring time/h Reference preparation (Batch DN5398) Homemade preparation (Batch 02204401) Recovery/% RSD/% Recovery/% RSD/% 0.46 3 99.29 0.81 99.37 0.76 0.46 2 99.21 0.86 98.42 0.71 0.46 1 98.46 0.62 99.65 0.96 0.23 3 98.51 0.81 98.36 0.61 0.23 2 98.62 0.90 99.70 0.49 0.23 1 98.19 0.25 98.27 0.33
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[1] Miller N, Noller M, Yang A, et al. Lesser known uses of γ-aminobutyric acid analogue medications in otolaryngology[J]. Laryngoscope, 2022, 132(5): 954-964. doi: 10.1002/lary.29855
[2] Domon Y, Kobayashi N, Kubota K, et al. The novel gabapentinoid mirogabalin prevents upregulation of α2δ-1 subunit of voltage-gated calcium channels in spinal dorsal horn in a rat model of spinal nerve ligation[J]. Drug Res, 2023, 73(1): 54-60. doi: 10.1055/a-1941-8907
[3] Reyes Fernandez PC, Wright CS, Warden SJ, et al. Effects of gabapentin and pregabalin on calcium homeostasis: implications for physical rehabilitation of musculoskeletal tissues[J]. Curr Osteoporos Rep, 2022, 20(6): 365-378. doi: 10.1007/s11914-022-00750-x
[4] Tesfaye S, Sloan G, Petrie J, et al. Optimal pharmacotherapy pathway in adults with diabetic peripheral neuropathic pain: the OPTION-DM RCT[J]. Health Technol Assess, 2022, 26(39): 1-100. doi: 10.3310/RXUO6757
[5] Peng K. Effectiveness and safety of pregabalin for the relief of neuropathic pain[J]. Shenzhen J Integr Tradit Chin West Med (深圳中西医结合杂志), 2022, 32(18): 111-113. [6] Liu B, Zhang JS, Lu FY, et al. Therapeutic effect of pregabalin on postherpetic neuralgia[J]. Dermatol Venereol (皮肤病与性病), 2022, 44(1): 64-65. [7] Qin C, Wu MM, Xu SY, et al. Design and optimization of gastro-floating sustained-release tablet of pregabalin: in vitro and in vivo evaluation[J]. Int J Pharm, 2018, 545(1/2): 37-44.
[8] Moon SJ, Jeon JY, Lim Y, et al. Pharmacokinetics of a new, once-daily, sustained-release pregabalin tablet in healthy male volunteers[J]. Clin Ther, 2021, 43 (8): 1381-1391.
[9] Xia YJ, Wang ZM, Gao J, et al. In vitro release and in vivo pharmacokinetics in Beagle dogs of pregabalin sustained-release tablets[J]. J Int Pharm Res (国际药学研究杂志), 2020, 47 (8): 658-665. [10] Gao R, Ma YZ, Zhao HX, et al. Bioequivalence of pregabalin extended release tablets in healthy Chinese volunteers[J]. Chin J Clin Pharmacol (中国临床药理学杂志), 2022, 38(13): 1516-1521. [11] Draksler P, Mikac U, Laggner P, et al. Polyethylene oxide matrix tablet swelling evolution: the impact of molecular mass and tablet composition[J]. Acta Pharm, 2021, 71(2): 215-243. doi: 10.2478/acph-2021-0018
[12] Guo HY, Yi BW, Yan XP, et al. Application status of carbomer in gel preparations[J]. Chin J Exp Tradit Med Formulae (中国实验方剂学杂志), 2013, 19(17): 371-374. [13] Shi WX, Yin LF, Zhu L, et al. Preparation of pregabalin gastric retention sustained-release tablets and study on release mechanism in vitro[J]. Strait Pharm J (海峡药学), 2018, 30(10): 9-13. [14] Zhai XC, Gu YJ. Prescription process study of pregabalin gastric floating extended release tablets[J/OL]. Chin J Pharm(中国药剂学杂志), 2017, 15 (3): 67-74[2023-01-06]. https://qikan.cqvip.com/Qikan/Article/Detail?id=80907189504849554851484851. [15] Luo ZL. Dynamics of polymer chains in solutions investigated by analytical ultracentrifuge(超速离心分析研究高分子在溶液中的动力学行为)[D]. Hefei: University of Science and Technology of China, 2011. [16] Chinese Pharmacopoeia Commission. Chinese Pharmacopoeia: part 4 (中华人民共和国药典: 四部) [S]. Beijing: China Medical Science Press, 2020: 481-482. -
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1. 刘彪. 血清微小RNA-27a、微小RNA-147、前列腺素E2水平与肺结核患者病情严重程度的关系研究. 陕西医学杂志. 2025(04): 510-514 . 
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