通络生骨胶囊原粉化学成分鉴定及牡荆苷含量测定

吴革林; 范瑞鑫; 梁楚玲; 邢冷; 谢永建; 龚平; 周鹏; 李博

doi:10.11665/j.issn.1000-5048.2024090301

通络生骨胶囊原粉化学成分鉴定及牡荆苷含量测定

吴革林^{1, 2,},
范瑞鑫³,
梁楚玲^{3, 4},
邢冷¹,
谢永建¹,
龚平¹,
周鹏¹,
李博^{3, 4, ,}

1.
浙江赞生药业有限公司, 台州318000
2.
杭州赞生医药有限公司, 杭州310052
3.
中国药科大学(杭州)创新药物研究院, 杭州310018
4.
中国药科大学药学院, 南京211198

详细信息

通讯作者:
李博: Tel：13913993019　E-mail：libo@cpu.edu.cn

中图分类号: R917
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出版历程
- 收稿日期: 2024-09-02
- 刊出日期: 2025-04-24

Identification of chemical components and determination of vitexin in the raw powder of Tongluo Shenggu capsule

WU Gelin^{1, 2,},
FAN Ruixin³,
LIANG Chuling^{3, 4},
XING Leng¹,
XIE Yongjian¹,
GONG Ping¹,
ZHOU Peng¹,
LI Bo^{3, 4, ,}

1.
Zhejiang Pralife Pharmaceutical Co., Ltd., Taizhou 318000
2.
Hangzhou Zansheng Pharmaceutical Co., Ltd., Hangzhou 310052
3.
China Pharmaceutical University Hangzhou Institute of Innovative Pharmaceutics, Hangzhou 310018
4.
School of Pharmacy, China Pharmaceutical University, Nanjing 211198, China

摘要

摘要:
采用UPLC-MS/MS对通络生骨胶囊原粉中的化合物进行分析鉴定，并建立牡荆苷HPLC含量测定方法。通过采用Acquity UPLC^® BEH C₁₈（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）色谱柱，以0.2%甲酸-甲醇为流动相进行梯度洗脱，柱温30 ℃，流速0.3 mL/min，进样量1 μL；通过ESI质谱源，在正、负离子模式下分别采集数据，成功鉴定出通络生骨胶囊原粉中的12个黄酮类和3个芪类化合物。同时，采用XBridge C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 µm）色谱柱，以0.05%冰醋酸-甲醇为流动相进行梯度洗脱，柱温30 ℃，流速1.0 mL/min，进样量20 µL，建立了牡荆苷的HPLC含量测定方法。该方法在10~40 µg/mL范围内线性关系良好（R=1.000），平均回收率为96.7%。这些方法的建立为通络生骨胶囊原粉的质量控制和开发利用提供了科学依据。
- 通络生骨胶囊 /
- 化学成分 /
- UPLC-MS/MS /
- 牡荆苷 /
- HPLC
Abstract:
The present study employed UPLC-MS/MS to analyze and identify compounds in the raw powder of Tongluo Shenggu capsules. An HPLC method for the determination of vitexin content was established. The analysis of this drug was performed on a 30 ℃ thermostatic Acquity UPLC^® BEH C₁₈ (2.1 mm×100 mm,1.7 μm) column, with the mobile phase comprising 0.2% formic acid-methanol flowing at 0.3 mL /min in a gradient elution manner. Mass spectrometry was detected by ESI sources in both positive and negative ion modes for qualitative identification of chemical constituents. 12 flavonoid and 3 stilbenes compounds in the raw powder of Tongluo Shenggu capsules were successfully identified. Additionally, an HPLC method for the determination of vitexin content was established using a XBridge C₁₈ column (4.6 mm × 250 mm, 5 µm) with a mobile phase of 0.05% glacial acetic acid in methanol for gradient elution, at a column temperature of 30 °C, a flow rate of 1.0 mL/min, and an injection volume of 20 μL. The method demonstrated good linearity in the concentration range of 10 µg/mL to 40 µg/mL (R=1.000) with an average recovery rate of 96.7%. The establishment of these methods provides a scientific basis for the quality control and development of the raw powder of Tongluo Shenggu capsules.
- Tongluo Shenggu capsule /
- chemical components /
- UPLC-MS/MS /
- vitexin /
- HPLC

HTML全文

癌症作为一种严重危害人类健康的疾病，是世界各国都面临的公共卫生问题^[1]。根据国际癌症研究中心的数据显示，全球新发癌症病例和癌症死亡病例逐年增加^[2]。药物研发起源于先导物的发现和优化^[3]，基于药物设计原理，利用现有药物的结构或药效团，从而构建结构新颖的化合物，并利用活性筛选发现先导化合物是目前新药研发最经济有效的策略^[4−5]。

1,2-苯并噻嗪是多个药物的优势骨架，如非甾体抗炎药吡罗昔康等，具有多种生物活性。薁是由一个环庚三烯和一个环戊二烯稠合而成，是萘的同分异构体。由于其特殊的电子结构和物理化学性质，使其广泛应用于医药、农药和光学材料等领域^[6−11]，因而受到研究者的广泛关注。为了进一步研究杂环修饰的1,2-苯并噻嗪类化合物的合成及其生物活性，寻找具有生物活性的新化合物，本研究以吡罗昔康合成中间体1（2-甲基-4-羟基-2H-1,2-苯并噻嗪-3-甲酸甲酯-1,1-二氧化物，CAS:35511-15-0）为原料，首次将类薁基引入1,2-苯并噻嗪结构中，制备一系列结构新颖的1,2-苯并噻嗪类化合物6a~6j，合成路线见路线1。

1. Synthetic route of the target compounds

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1. 实验部分

1.1 仪器与试剂

熔点用毛细管法测定，温度未校正； AM2400型核磁共振仪（德国Bruker公司）；HP1100型质谱仪（美国Agilent公司）；PE2400-Ⅱ元素分析仪（美国PE公司）；化合物1为吡罗昔康合成中间体（CAS:35511-15-0）来自商业品，化合物2（2-甲基-4-羟基-2H-1,2-苯并噻嗪-3-甲酰肼-1,1-二氧化物）按文献^[12]的方法制备，试剂均为市售分析纯，未经处理，直接使用。

1.2 合成方法及结果

1.2.1 化合物3（2-甲基-4-羟基-3-（5-巯基-1,3,4-噁二唑-2-基）-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物）的合成

取氢氧化钾（4.7 g, 0.084 mol），无水乙醇120 mL，依次加入250 mL三口瓶中，完全溶解后，加入化合物2（15 g, 0.056 mol），冰浴降温至0℃左右，控制温度（0~5 ℃），恒压滴液漏斗滴加二硫化碳（5 mL, 0.083 mol），滴加结束后，自然升至室温，搅拌反应4 h后，加热至回流并反应9 h，利用TLC检测（乙酸乙酯-石油醚, 2∶1），反应结束后，自然冷却至室温，调节pH2~3，过滤，用乙醇重结晶，60 ℃鼓风干燥，得黄色化合物12.5 g，收率72%，mp:251~252 ℃。

1.2.2 化合物4（2-甲基-4-羟基-3-（4-氨基-5-巯基-4H-12,4-三唑-3-基）-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物）的合成

取化合物3（10 g, 0.032 mol），80%水合肼（100 mL, 1.651 mol）依次加入250 mL三口瓶中，加热回流（约100 ℃）8 h，TLC检测（乙酸乙酯-石油醚, 3∶1），反应完成后，将反应液浓缩至黏稠状，加水80 mL，调节pH至中性，静置，析出沉淀后，过滤，用乙醇重结晶，60 ℃干燥得到黄色化合物4.8 g，收率46%，mp:208~209 ℃。

1.2.3 化合物5a（3-（（4-氨基-5-（2-甲基-4-羟基-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物-3-基）-4H-1，2,4-三唑-3-基）硫代）-1-苯丙酮）的合成

取化合物4（3.5 g, 0.011 mol），无水乙醇20 mL，依次加入250 mL三口瓶中，搅拌均匀，加入1 mol/L氢氧化钠溶液，调节pH至9~10，待完全溶解后，加入3-氯苯乙酮（2.2 g, 0.013 mol），常温下搅拌反应6 h（过程中注意监测溶液的pH，控制pH 9~10），待反应结束后，静置，过滤，用乙醇重结晶，干燥黄色化合物2.2 g，mp:192~193 ℃，收率45%。

按化合物5a相似的方法分别制备目标物5b～5j。

1.2.4 化合物6a（2-甲基-4-羟基-3-（6-苯基-7,8-二氢-[1,2,4]三唑并[3,4-b][1,3,4]噻二氮杂䓬-3-基）-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物）的合成

向100 mL单口瓶中，加入化合物5a（1.1 g, 0.002 mol），无水乙醇10 mL，滴加5~6 滴浓硫酸，加热至回流，反应5 h，TLC检测（乙酸乙酯-石油醚, 1∶1），反应结束后，自然冷却至室温，过滤，得黄色化合物0.7 g。收率64%，mp：229~231 ℃。

按化合物6a相似的方法分别制备目标物6b～6j。理化性质和光谱数据见表1和表2。

Table 1. Physical properties of compounds 5a – 5j and 6a – 6j

Compd.	Formula	Yield/%	mp/℃	Elemental analysis（%,Calcd.）
Compd.	Formula	Yield/%	mp/℃	C	H	N
5a	C₂₀H₁₉N₅O₄S₂	45	192–193	55.52（55.50）	4.21（4.19）	15.27（15.31）
5b	C₂₀H₁₈FN₅O₄S₂	47	196–198	50.48（50.52）	3.78（3.82）	14.81（14.73）
5c	C₂₀H₁₇BrFN₅O₄S₂	45	203–205	43.35（43.33）	3.05（3.09）	12.65（12.63）
5d	C₂₀H₁₉N₅O₅S₂	42	202–204	50.75（50.73）	4.02（4.04）	14.75（14.79）
5e	C₂₁H₂₁N₅O₄S₂	48	198–200	53.53（53.49）	4.55（4.49）	14.81（14.85）
5f	C₂₀H₁₇Cl₂N₅O₄S₂	49	210–212	45.65（45.63）	3.32（3.26）	13.34（13.30）
5g	C₁₈H₁₇N₅O₄S₃	52	221–223	46.58（46.64）	3.68（3.70）	15.13（15.11）
5h	C₁₈H₂₂N₆O₄S₂	50	233–235	47.91（47.99）	4.88（4.92）	18.69（18.65）
5i	C₂₃H₂₃N₅O₄S₂	42	228–230	55.48（55.52）	4.68（4.66）	14.03（14.07）
5j	C₂₃H₂₄N₆O₄S₂	41	225–227	53.93（53.89）	4.74（4.72）	16.36（16.40）
6a	C₂₀H₁₇N₅O₃S₂	64	229–231	54.60（54.66）	3.94（3.90）	15.97（15.93）
6b	C₂₀H₁₆FN₅O₃S₂	65	222–224	52.57（52.51）	3.51（3.53）	15.35（15.31）
6c	C₂₀H₁₅BrFN₅O₃S₂	60	224–226	44.86（44.78）	2.86（2.82）	13.12（13.06）
6d	C₂₀H₁₇N₅O₄S₂	61	223–226	52.68（52.74）	3.72（3.76）	15.36（15.38）
6e	C₂₁H₁₉N₅O₃S₂	67	225–227	55.63（55.61）	4.26（4.22）	15.38（15.44）
6f	C₂₀H₁₅Cl₂N₅O₃S₂	66	240–242	47.19（47.25）	2.99（2.97）	13.80（13.78）
6g	C₁₈H₁₅N₅O₃S₃	73	249–251	48.57（48.53）	3.35（3.39）	15.70（15.72）
6h	C₁₈H₂₀N₆O₃S₂	71	261–263	49.95（49.99）	4.72（4.66）	19.45（19.43）
6i	C₂₃H₂₁N₅O₃S₂	59	258–260	57.64（57.60）	4.39（4.41）	14.62（14.60）
6j	C₂₃H₂₂N₆O₃S₂	59	252–254	55.82（55.86）	4.54（4.48）	16.95（16.99）

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Table 2. Spectral data of compounds 3 – 6i

Compd.	¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ	¹³C NMR (100 MHz , DMSO-d₆) δ	MS m/z [M+H]⁺
3	12.96(1H，s，-OH)，7.73-7.95(4H，m，Ph-H)，3.00(3H，s，-NCH₃)	160，156，134，132，129，127，124，110，37	312
4	12.84(1H，s，-OH)，7.69-7.91(4H，m，Ph-H)，5.27(2H，s，-NH₂)，3.11(3H，s，-NCH₃)	167，156，144，134，132，129，127，124，111，38	326
5a	12.88(1H，s，-OH)，7.65-7.89(9H，m，Ph-H)，5.43(2H，s，-NH₂)，3.31(2H，t，-SCH₂)，3.13(3H，s，-NCH₃)，3.05(2H，t，-CH₂-C=O)	200，159，156，144，137，134，133，132，129，127，124，111，42，38，27	458
5b	12.82(1H，s，-OH)，7.45-7.86(8H，m，Ph-H)，5.46(2H，s，-NH₂)，3.35(2H，t，-SCH₂)，3.12(3H，s，-NCH₃)，3.02(2H，t，-CH₂-C=O)	200，162，158，156，143，135，134，133，132，128，127，124，111，41，38，28	476
5c	12.78(1H，s，-OH)，7.36-8.06(7H，m，Ph-H)，5.54(2H，s，-NH₂)，3.29(2H，t，-SCH₂)，3.07(3H，s，-NCH₃)，2.97(2H，t，-CH₂-C=O)	200，161，159，156，144，138，134，133，132，128，127，124，118，110，41，38，28	554
5d	12.77(1H，s，-OH)，10.68(1H，s，Ph-OH)，7.18-7.86(8H，m，Ph-H)，5.48(2H，s，-NH₂)，3.17(2H，t，-SCH₂)，3.09(3H，s，-NCH₃)，2.93(2H，t，-CH₂-C=O)	200，163，159，156，144，135，133，132，129，127，124，122，118，110，41，38，28	474
5e	12.83(1H，s，-OH)，7.21-7.87(8H，m，Ph-H)，5.64(2H，s，-NH₂)，3.22(2H，t，-SCH₂)，3.11(3H，s，-NCH₃)，2.95(2H，t，-CH₂-C=O)，1.51(3H，s，Ph-CH₃)	200，160，156，144，143，135，134，133，132，129，127，124，118，110，42，38，28，21	472
5f	12.84(1H，s，-OH)，7.66-8.26(7H，m，Ph-H)，5.52(2H，s，-NH₂)，3.27(2H，t，-SCH₂)，3.07(3H，s，-NCH₃)，2.98(2H，t，-CH₂-C=O)	200，159，156，144，138，136，134，133，132，130，128，127，110，41，38，28	526
5g	12.80(1H，s，-OH)，7.32-7.86(4H，m，Ph-H)，7.16-7.66(3H，d，thiophene-H)，5.44(2H，s，-NH₂)，3.27(2H，t，-SCH₂)，3.11(3H，s，-NCH₃)，2.98(2H，t，-CH₂-C=O)	192，159，156，144，134，133，132，129，127，124，110，40，37，27	464
5h	12.78(1H，s，-OH)，7.34-7.88(4H，m，Ph-H)，5.50(2H，s，-NH₂)，3.23(2H，t，-SCH₂)，3.10(3H，s，-NCH₃)，2.95(2H，t，-CH₂-C=O)，2.69(4H，t，-CH₂-N-CH₂)，1.33(4H，t，pyrrolidine-CH₂-CH₂)	175，159，156，144，142，135，134，132，129，127，124，110，49，38，32，29，25	451
5i	12.82(1H，s，-OH)，7.34-7.85(7H，m，Ph-H)，5.58(2H，s，-NH₂)，3.19(2H，t，-SCH₂)，3.11(3H，s，-NCH₃)，2.89(2H，t，-CH₂-C=O)，1.35-1.95(6H，m，-CH₂-CH₂-CH₂)	200，159，156，148，144，142，135，134，132，129，127，126，124，110，40，38，33，28，25	498
5j	12.86(1H，s，-OH)，7.26-7.82(8H，m，Ph-H)，5.62(2H，s，-NH₂)，3.32-4.42(6H，m，piperidine-H)，3.29(2H，t，-SCH₂)，3.03(3H，s，-NCH₃)，2.77(2H，t，-CH₂-C=O)，	172，159，156，144，135，134，132，129，127，126，124，111，49，48，38，32，29	513
6a	12.78(1H，s，-OH)，7.65-7.94(9H，m，Ph-H)，3.23(2H，t，-SCH₂)，3.07(3H，s，-NCH₃)，2.75(2H，t，-CH₂-C=N)	165，159，156，144，135，132，129，128，127，124，111，37，33，31	440
6b	12.68(1H，s，-OH)，7.46-7.84(8H，m，Ph-H)，3.31(2H，t，-SCH₂)，3.12(3H，s，-NCH₃)，2.79(2H，t，-CH₂-C=N)	165，160，159，156，144，135，133，132，131，129，127，124，116，111，37，33，31	458
6c	12.74(1H，s，-OH)，7.30-7.96(7H，m，Ph-H)，3.29(2H，t，-SCH₂)，3.03(3H，s，-NCH₃)，2.69(2H，t，-CH₂-C=N)	165，159，156，144，138，136，135，132，128，124，120，118，110，37，33，31	536
6d	12.78(1H，s，-OH)，10.66(1H，s，Ph-OH)，7.12-7.76(8H，m，Ph-H)，3.19(2H，t，-SCH₂)，3.11(3H，s，-NCH₃)，2.73(2H，t，-CH₂-C=N)	165，163，159，156，144，135，132，129，127，124，121，118，110，37，33，31	456
6e	12.73(1H，s，-OH)，7.18-7.87(8H，m，Ph-H)，3.27(2H，t，-SCH₂)，3.07(3H，s，-NCH₃)，2.75(2H，t，-CH₂-C=N)，1.47(3H，s，Ph-CH₃)	165，159，156，144，141，135，132，131，129，127，124，110，42，37，33，31，21	454
6f	12.74(1H，s，-OH)，7.56-8.18(7H，m，Ph-H)，3.19(2H，t，-SCH₂)，3.01(3H，s，-NCH₃)，2.68(2H，t，-CH₂-C=N)	165，159，156，144，138，136，135，134，132，130，129，126，110，37，33，31	508
6g	12.82(1H，s，-OH)，7.44-7.84(4H，m，Ph-H)，7.10-7.62(3H，d，thiophene-H)，3.20(2H，t，-SCH₂)，2.993H，(s，-NCH₃)，2.68(2H，t，-CH₂-C=N)	165，159，156，144，134，132，129，127，126，124，110，37，34，31	446
6h	12.74(1H，s，-OH)，7.44-7.78(4H，m，Ph-H)，3.23(2H，t，-SCH₂)，3.04(3H，s，-NCH₃)，2.75(2H，t，-CH₂-C=N)，2.58(4H，t，-CH₂-N-CH₂)，1.66(4H，t，pyrrolidine-CH₂-CH₂)	159，156，149，144，134，132，129，127，124，110，49，37，31，30，26	433
6i	12.76(1H，s，-OH)，7.44-7.84(7H，m，Ph-H)，3.23(2H，t，-SCH₂)，3.13(3H，s，-NCH₃)，2.63(2H，t，-CH₂-C=N)，1.35-1.87(6H，m，-CH₂-CH₂-CH₂)	165，159，156，149，146，144，135，132，129，127，124，110，37，33，31，25	480
6j	12.82(1H，s，-OH)，7.22-7.78(8H，m，Ph-H)，3.36-4.44(6H，m，piperidine-H)，3.25(2H，t，-SCH₂)，3.07(3H，s，-NCH₃)，2.73(2H，t，-CH₂-C=N)，	159，156，144，140，135，134，132，130，129，126，123，111，45，37，32，27，22	495

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2. 抗肿瘤活性研究

对合成的目标化合物，蒽醌类抗肿瘤药物多柔比星以及母体吡罗昔康合成中间体（化合物1）进行抗肿瘤活性评价。采用MTT法测定对人胰腺癌细胞Capan-1（中国医学科学院协和细胞库）、鼠白血病细胞L1210（中国医学科学院协和细胞库）和人肝癌细胞SMMC-7721（中国医学科学院协和细胞库）的半数抑制浓度（IC₅₀），结果见表3。

Table 3. Anti-cell proliferative activity of the tested compounds against Capan-1, SMMC-7721 and L1210 tumor cells（$\bar{x}\pm s $, n=3）

Compd.	IC₅₀/（μmol/L）
Compd.	Capan-1	SMMC-7721	L1210
6a	15.7±1.4	18.2±1.7	14.6±1.5
6b	9.8±1.0	8.6±0.9	2.6±0.3
6c	9.6±1.0*	2.1±0.2*	8.7±0.8*
6d	10.8±1.1*	11.6±1.2	10.2±1.0*
6e	14.6±1.5	15.3±1.5	16.2±1.6
6f	4.8±0.5*	8.7±0.7*	9.4±0.9*
6g	11.4±1.2	14.1±1.4	15.8±1.6
6h	11.8±1.2	13.6±1.4*	13.8±1.4
6i	11.7±1.2	10.7±1.2*	9.2±0.9*
6j	12.8±1.3	11.6±1.2	13.6±1.4
Doxorubicin	3.5±0.6	2.7±0.2	1.4±0.2
1	>100	>100	>100
2	80.2±8.1	78.5±7.3	77.4±7.3
3	65.5±6.6	71.7±7.2	73.6±7.5
4	64.6±6.5	70.3±7.0	72.5±7.2
5a	15.2±1.4	17.2±1.7	15.6±1.6
5b	10.2±1.0	9.2±0.9	2.4±0.3
5c	9.8±1.0*	6.2±0.6*	6.7±0.8*
5d	10.6±1.1*	10.8±1.2	9.8±1.0*
5e	15.6±1.5	15.1±1.5	15.4±1.5
5f	7.6±0.7*	8.2±0.7*	8.8±0.9*
5g	12.2±1.2	14.3±1.4	14.2±1.4
5h	12.6±1.2	11.2±1.1*	13.6±1.4
5i	12.7±1.3	11.6±1.2*	8.6±0.9*
5j	11.8±1.2	13.6±1.4	15.2±1.5
*P<0.05 vs doxorubicin

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体外抗肿瘤实验结果显示，10个目标化合物（6a~6j）对人胰腺癌细胞Capan-1、鼠白血病细胞L1210和人肝癌细胞SMMC-7721呈现出不同程度的抑制作用（IC₅₀均小于20 μmol/L），其中化合物6f、6g和6h对Capan-1、L1210和SMMC-7721的IC₅₀与对照多柔比星的活性相当。

初步的构效关系研究表明，薁类衍生物的引入，有利于化合物电荷的分散而更加稳定，对提高该类化合物的抗肿瘤活性有一定的作用。更有意义的是，在稠杂环结构上引入含有吸电子基团的取代基时，化合物的抗肿瘤活性进一步增强，具有进一步研究的价值，这也预示着1,2-苯并噻嗪结构的修饰在肿瘤治疗方面将会有更加广阔的研究前景。

Figure 1. Typical UPLC chromatogram of the raw powder of Tongluo Shenggu capsule

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Figure 2. Fragmentation pathway of compound 10

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Figure 3. MS/MS spectrum and fragmentation pathway of compound 16

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Figure 4. MS/MS spectrum and fragmentation pathway of compound 22

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Figure 5. MS/MS spectrum and fragmentation pathway of compound 23

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Figure 6. Typical HPLC chromatograms of Vitexin reference substance (A) and the raw powder of Tongluo Shenggu capsule (B)

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Table 1 LC-MS/MS data of the raw powder of Tongluo Shenggu capsule

Compd.	t_R/min	Adduct	Precursor (m/z)	Fragments (m/z)
1	0.96	[M–H]^-	191.21	147.60，127.19，84.78，57.18
2	1.99	[M+H]⁺	284.33	223.06，214.75，202.02，152.04，135.27，115.29
3	2.79	[M+H]⁺	434.79	403.10，388.56，201.34
4	5.40	[M+H]⁺	294.98	277.01，172.71，156.83，130.23，84.16
5	5.68	[M+H]⁺	295.06	277.08，201.01，156.83，130.23，91.28
6	8.10	[M+H]⁺	611.63	592.94，575.53，557.17，539.06，515.46， 491.11，473.13，443.34，395.07，371.09
7	9.85	[M+H]⁺	595.49	577.45，558.83，541.03，523.11，474.97，456.97，355.27
8	9.90	[M+H]⁺	595.88	577.83，530.51，458.07，427.97，394.37
9	10.76	[M+H]⁺	581.40	563.42，545.37，527.13，491.29，443.21， 425.04，395.45，340.93
10	11.08	[M+H]⁺	581.02	563.27，544.86，491.05，443.10，395.32，341.31
11	12.26	[M+H]⁺	449.28	430.78，413.18，353.04，328.94，299.03
12	12.56	[M+H]⁺	448.70	430.84，413.24，352.91，329.06，299.16
13	12.98	[M+H]⁺	565.14	547.41，529.05，510.81，499.06，325.37
14	13.62	[M+H]⁺	565.14	546.96，529.36，511.00，499.01，325.045
15	13.94	[M+H]⁺	564.82	547.09，529.17，511.32，499.46，325.05
16	14.94	[M+H]⁺	433.07	415.09，397.42，379.06，366.75，313.25， 283.21
17	16.90	[M+H]⁺	432.94	414.90，397.04，378.68，367.01，313.25， 283.09
18	17.23	[M+H]⁺	365.35	346.92，254.58，183.35，155.17，126.92
19	19.46	[M+H]⁺	534.98	499.06，396.97，379.02，295.28
20	20.61	[M+H]⁺	397.36	379.25，321.86，2269.70，209.18，114.17
21	22.79	[M+H]⁺	588.61	493.21，408.58，278.75
22	23.90	[M+H]⁺	521.20	493.46，398.70，228.50，209.24
23	24.74	[M+H]⁺	341.24	323.39，295.08，209.18，139.10，97.33
24	25.53	[M+H]⁺	301.20	283.21，269.12，219.13，163.27
25	28.78	[M–H]^-	311.25	293.06，236.85，206.04，188.24
26	30.53	[M–H]^-	253.32	235.12，221.23，186.22，97.24

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Table 2 Identification results of each compound

Compd.	t_R/min	Compound	Formula
6	8.10	Lucenin-II	C₂₇H₃₀O₁₆
7	9.85	vicenin-II	C₂₇H₃₀O₁₅
9	10.76	Isocarlinoside	C₂₆H₂₈O₁₅
10	11.08	Carlinoside	C₂₆H₂₈O₁₅
11	12.26	Orientin	C₂₁H₂₀O₁₁
12	12.56	Homoorientin	C₂₁H₂₀O₁₁
13	12.98	Isoshaftoside	C₂₆H₂₈O₁₄
14	13.62	Schaftoside	C₂₆H₂₈O₁₄
15	13.94	Neoshaftoside	C₂₆H₂₈O₁₄
16	14.94	Vitexin	C₂₁H₂₀O₁₀
17	16.90	Isovitexin	C₂₁H₂₀O₁₀
19	19.46	6,8-Di-C-α-L-arabinopyranosyl apigenin	C₂₅H₂₆O₁₃
21	22.79	Cajanstilbenoids A	C₄₀H₄₄O₄
22	23.90	Cajanstilbenoids B	C₃₅H₃₆O₄
23	24.74	Amorfrutin A	C₂₁H₂₄O₄

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参考文献(29)

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施引文献(8)

期刊类型引用(5)

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1. 实验部分
1.1 仪器与试剂
1.2 合成方法及结果
1.2.1 化合物3（2-甲基-4-羟基-3-（5-巯基-1,3,4-噁二唑-2-基）-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物）的合成
1.2.2 化合物4（2-甲基-4-羟基-3-（4-氨基-5-巯基-4H-12,4-三唑-3-基）-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物）的合成
1.2.3 化合物5a（3-（（4-氨基-5-（2-甲基-4-羟基-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物-3-基）-4H-1，2,4-三唑-3-基）硫代）-1-苯丙酮）的合成
1.2.4 化合物6a（2-甲基-4-羟基-3-（6-苯基-7,8-二氢-[1,2,4]三唑并[3,4-b][1,3,4]噻二氮杂䓬-3-基）-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物）的合成
2. 抗肿瘤活性研究

1. 实验部分
1.1 仪器与试剂
1.2 合成方法及结果
1.2.1 化合物3（2-甲基-4-羟基-3-（5-巯基-1,3,4-噁二唑-2-基）-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物）的合成
1.2.2 化合物4（2-甲基-4-羟基-3-（4-氨基-5-巯基-4H-12,4-三唑-3-基）-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物）的合成
1.2.3 化合物5a（3-（（4-氨基-5-（2-甲基-4-羟基-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物-3-基）-4H-1，2,4-三唑-3-基）硫代）-1-苯丙酮）的合成
1.2.4 化合物6a（2-甲基-4-羟基-3-（6-苯基-7,8-二氢-[1,2,4]三唑并[3,4-b][1,3,4]噻二氮杂䓬-3-基）-2H-1,2-苯并噻嗪-1,1-二氧化物）的合成
2. 抗肿瘤活性研究

参考文献(29)

施引文献(8)

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通络生骨胶囊原粉化学成分鉴定及牡荆苷含量测定

通讯作者: 李博: Tel：13913993019 E-mail：libo@cpu.edu.cn

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