摘要: 为实现水蛭素Ⅲ（ＨＶ３）基因的分泌表达，设计合成了两对（四条）寡核苷酸链，退火、拼连成Ｌ门冬酰胺酶信号肽简并基因，同时利用密码子的简并性在该基因３′端基因内引入了一个ＮｈｅⅠ限制酶切位点。此外，用ＰＣＲ技术在ＨＶ３基因５′端引入ＮｈｅⅠ限制酶切位点，利用该酶切位点将信号肽基因与ＨＶ３基因进行连接且保护原有阅读框架不变，构建了重组质粒ｐＵＣＳＨ，测序结果表明，融合基因核苷酸序列与设计要求完全一致，将该融合基因插入ｐＫＫ２３３２中构建成ＨＶ３分泌表达质粒ｐＫＳＨ，该质粒在大肠杆菌中表达后，表达产物分泌至细胞膜间质中，膜间质蛋白抽提液抗凝血酶生物活性为１０１４ＡＴＵ／ｍｌ培养液。