利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子-2(hIGF-2)
Effective Expression of Human Insulin Like Growth Factor-2 in Bombyx Mori Larvae
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摘要: 目的 :研制有生物活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子 -2 (rh IGF-2 )。方法 :将 14 k Dh IGF -2前体 c DNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (Bm NPV )转移载体 p Bak PAK8中 ,经与野生型病毒 DNA共转染家蚕细胞后 ,通过体内同源重组的方式获得重组病毒 Bm NPV/ IGF-2。以 Bm NPV/ IGF-2感染 5龄家蚕幼虫 ,分别在感染后 2 4,48,72 ,96,10 8,12 0 h提取家蚕血淋巴液 ,以 ELISA法测定不同时象家蚕血中 IGF-2浓度 ,采用 Western-blot分析鉴定 IGF -2免疫学活性 ,MTT法观察其对 NIH3 T3细胞增殖的影响。结果 :ELISA测定显示 ,Bm NPV/ IGF-2感染家蚕幼虫 96h后 IGF-2表达率最高 ,每毫升血淋巴中约含 IGF-2 14 μg,Western-blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成 7.0 k D成熟 h IGF-2 ,并对 NIH3 T3细胞具有良好促增殖效应 ,其促细胞生长能力明显优于来源于 E.coli的 IGF-2标准品。结论 :本研究实现具有免疫学活性及生物学活性的rh IGF-2在家蚕杆状病毒表达系统的高效表达
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关键词:
- 人胰岛素样生长因子-2 /
- 家蚕核型多角体病毒 /
- 基因表达 /
- 免疫学活性 /
- 生物学活性
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