聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用

基金项目: 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家自然科学基金，江苏省自然科学基金

Application of Silver Staining of Polyacrylamide Gels in Semi-Quantitative RT-PCR

摘要: 目的:探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用.方法:提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA,逆转录得到cDNA第一链,以此为模板进行PCR扩增,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数及模板量与PCR产物量间的关系.结果:PCR扩增反应在第20～25个循环,起始模板量为0.8～2.4μg时,PCR产物量与起始模板量呈现较好的线性关系.结论:通过控制起始模板量,减少PCR循环数使目的基因的扩增处于PCR扩增指数期,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DM银染技术,可以通过比较PCR扩增产物量的变化以分析目的基因表达水平的差异.
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 /
- DNA银染 /
- 半定量RT-PCR
- Polyacrylamide gel /
- Silver staining /
- Semi quantitative RT PCR