金银花nrDNA ITS区聚合酶链反应条件的研究

基金项目: 国家自然科学基金，教育部跨世纪优秀人才培养计划，教育部优秀青年教师资助计划

Studies on Polymerase Chain Reaction Conditions of nrDNA ITS Region of Lonicera japonica Thunb

摘要: 目的:金银花nrDNA ITS区序列G C含量为68%,用常规的PCR方法扩增效果差.本研究通过改变扩增程序及使用改性剂的方法显著提高了金银花nrDNA ITS区的扩增效率.方法:分别从金银花叶及药材中提取总DNA,通过优化扩增条件,对nrDNA ITS区进行扩增,并比较了两种优化方法的差别及适应性.方法1:提高变性温度至97℃;方法2:添加混合改性剂(DMSO 4%-甘油10%).结果:与方法1相比,方法2可降低变性温度5 ℃,升高退火温度9 ℃,降低镁离子浓度至0.5 mmol/L,降低Taq DNA聚合酶用量至0.1 U(30 μl体系),PCR产物量显著提高,且可消除植物DNA粗提物中杂质的干扰.结论:通过提高退火温度及添加改性剂可克服高G C含量金银花nrDNA ITS区序列扩增的困难,该方法的建立有助于解决植物来源DNA模板的PCR扩增问题.
- 金银花 /
- nrDNA ITS区 /
- 高G C含量 /
- PCR扩增 /
- 反应条件优化
- Lonicera japonica Thunb. /
- nrDNA ITS region /
- G C rich /
- PCR amplification /
- Modification of reaction condition