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NF-κB p50蛋白的原核表达及纯化

  • 摘要: 目的:提供p50研究所需大量纯蛋白。方法:将编码p50N端39376aa肽段的cDNA片段插入到pET32a(+)载体的BamHⅠ和NcoⅠ酶切位点之间,构建了p50蛋白原核表达载体(pET-p50),用IPTG诱导表达,His-Bind柱进行纯化。结果:原核表达载体(pET-p50)30℃,0.1mmol/LIPTG诱导5h,重组蛋白大量表达,经凝胶迁移滞后实验证明纯化的重组p50蛋白具有序列特异性DNA结合活性。结论:在优化条件下,通过His-Bind柱亲和层析法可以获得大量重组蛋白,并通过凝胶迁移滞后实验证明其具有较高的活性。

     

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