整合素β3亚基不同片段在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因激活作用的检测
-
摘要: 目的:为建立用于筛选人血小板整合素蛋白αⅡbβ3拮抗剂的高通量药物筛选模型,对其β3亚基不同片段在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因的激活作用进行初步研究。方法:通过PCR扩增得到6个不同长度的整合素β3亚基基因片段,包括片段A1(55E-199Q)、A2(235K-385S)、A3(4Ⅰ-454T)、A4(4Ⅰ-77S)、A5(4Ⅰ-147S)和A6(4Ⅰ-284S),分别克隆到酵母双杂交诱饵载体pAS2-1中,然后将重组质粒导入酵母双杂交菌株Y190中,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因的激活作用。结果:6个片段对酵母均无毒性作用,片段A1、A2、A3、A5、A6不能激活报告基因HIS3和LacZ的表达,而片段A4和一个A3的缺失突变体可以激活报告基因的表达,β3亚基N末端存在一个转录激活区。结论:在建立模型时可以使用A1、A2、A3片段,但转录激活是否是β3亚基的生理功能仍有待进一步研究确证。
-
计量
- 文章访问数: 765
- HTML全文浏览量: 0
- PDF下载量: 965
下载:
