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重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化(英文)

王学军, 顾凯, 曹荣月, 林洁, 吴洁, 刘景晶

王学军, 顾凯, 曹荣月, 林洁, 吴洁, 刘景晶. 重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化(英文)[J]. 中国药科大学学报, 2006, 37(2): 174-180.
引用本文: 王学军, 顾凯, 曹荣月, 林洁, 吴洁, 刘景晶. 重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化(英文)[J]. 中国药科大学学报, 2006, 37(2): 174-180.

重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化(英文)

  • 摘要: 目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽。方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28a载体中,构建表达载体pEDCC。在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-hinge-DPKRKRKKSRNGS-GR-C-peptide以包涵体形式高效表达。融合蛋白经洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将PKRKRKKSRNGSGR-C-peptide释放出来。C肽N端14肽用胰蛋白酶切割,通过DE52柱与C-peptide分离。结果:构建的表达载体pEDCC序列正确,融合蛋白经分离纯化得到了高纯度的重组人源胰岛素原C肽。结论:以截短的门冬酰胺酶作为融合伙伴,并以富含碱性氨基酸的8肽调节等电点是一种生产重组人源胰岛素原C肽的有效方法。
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出版历程
  • 刊出日期:  2006-04-24

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