HPLC法测定人血红细胞巯基嘌呤甲基转移酶的活性
2D NMR study on cycloartane triterpenoids from Astragalus membranaceus var. mongholicus
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摘要: 目的:建立测定人血红细胞中巯基嘌呤甲基转移酶(thiopurine methyltransferase,TPMT)活性的HPLC方法。方法:以6-硫鸟嘌呤(6-TG)为底物,S-腺苷-L-甲硫氨酸为甲基供体,TPMT催化6-TG生成甲基化产物6-甲基硫鸟嘌呤,100℃加热终止反应并沉淀蛋白后,加60%高氯酸再次沉淀蛋白,离心后进样20μL检测。色谱柱:Shim-pack CLC-ODS(6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-水-三乙胺(24∶76∶0.4),磷酸调pH至4.8;流速:1.0mL/min;检测波长:313nm。结果:该方法在100~1700μg/mL浓度范围内线性良好,r=0.9997;高、中、低浓度样本的日内、日间RSD为2.28%~6.48%;回收率为100.56%~118.71%(n=5)。结论:所建立的方法稳定可靠、精密度好,适合临床大规模推广应用。
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