重组人促红细胞生成素的HPLC／ESI／MS肽图谱分析

HPLC/ESI/MS Analysis of rHuEPO

摘要: 重组人促红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）是一种复杂的糖蛋白药物，含有三个氮连接和一个氧连接的糖基化位点。肽图谱分析是糖蛋白分析的有效手段，可是由于糖基化的影响，不是所有理论酶解位点都酶解了，需要实验验证。本文采用谷氨酸内切酶（Ｇｌｕ－Ｃ）将ｒＨｕＥＰＯ所有糖基化位点酶解成含糖肽段，ＨＰＬＣ／ＥＳＩ／ＭＳ肽图谱分析，并通过源内碰撞诱导解离（Ｉｎ－ｓｏｕｒｃｅＣＩＤ）分析了氨基酸序列。理论肽段有７段，检出了６段，只有一个三肽未检出。实验得到了含双硫键的肽段，通过ＣＩＤ分析确证了小分子肽段的氨基酸序列。

Abstract: Recombinant human erythropoietin (rHuEPO) is highly glycosylated. It has three N-linked and one O-linked glycosylation sites. The analytical strategy includes enzymatic digestion, HPLC separation and structural determination. However with the influence of