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利用杆状病毒载体高效表达人胰岛素样生长因子-1及其纯化的研究[J]. 中国药科大学学报, 2004, (2): 76-80.
引用本文: 利用杆状病毒载体高效表达人胰岛素样生长因子-1及其纯化的研究[J]. 中国药科大学学报, 2004, (2): 76-80.
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Effective Expression and Purification of Human Insulin Like Growth Factor-1 in Bombyx Mori Nuclear Polyhedrosis Virus System[J]. Journal of China Pharmaceutical University, 2004, (2): 76-80.
Citation: Effective Expression and Purification of Human Insulin Like Growth Factor-1 in Bombyx Mori Nuclear Polyhedrosis Virus System[J]. Journal of China Pharmaceutical University, 2004, (2): 76-80.
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利用杆状病毒载体高效表达人胰岛素样生长因子-1及其纯化的研究

Effective Expression and Purification of Human Insulin Like Growth Factor-1 in Bombyx Mori Nuclear Polyhedrosis Virus System

    摘要
  • 摘要: 目的:利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的重组人胰岛素样生长因子-1(rhIGF-1).方法:将15kDhIGF-1前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒(BmNPV)转移载体pBakPAK8中,构建重组病毒BmNPV/IGF-l.用BmNPV/IGF-1感染家蚕幼虫,提取家蚕血淋巴液,采用亲和层析法纯化rhlGF-1,ELISA法测定rhIGF-1含量,用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定rhIGF-1纯度及免疫学活性,MTF法观察其对MCF-7细胞增殖的影响.结果:ELISA测定显示,BmNPV/IGF-1感染家蚕幼虫120h rhIGF-1含量达最高值(23.36μg/ml).rhIGF-1纯度为40%,Westem-blot分析发现主要纯化产物为7.5 kD成熟hIGF-1.细胞活性刺激实验显示,纯化后rhIGF-11对MCF-7细胞促增殖能力明显优于来源于大肠杆菌的rhIGF-1产品.结论:实现了具有免疫学活性及生物学活性rhlGF-1在杆状病毒表达系统的高效表达,并使rhIGF-1得到初步纯化.

     

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