复合干扰素在大肠杆菌中的高效表达与传代稳定性

Determination of four effective constituents in Swertia binchuanensis by HPLC

摘要: 目的:在大肠杆菌中高效、稳定地表达复合干扰素(con-IFN)。方法:根据大肠杆菌密码子的偏爱性,合成了复合干扰素基因、克隆至表达载体pBV220和转化大肠杆菌DH5α。筛选高表达菌株并传代105次。表达产物经过复性和离子交换;凝胶过滤层析纯化;用细胞病变抑制法测定其活性,并结合lowry法蛋白定量计算其比活性。结果:SDS-PAGE分析显示:重组蛋白在工程菌中表达量为41%,且稳定表达105代。重组蛋白纯化后纯度达到98%,工程菌表达的复合干扰素相对分子质量、末端氨基酸序列及等电点性质与预期结果一致,比活与其商品化产品干复津相当。结论:复合干扰素在大肠杆菌中获得高效、稳定的表达。