摘要: 目的:运用RNAi技术下调平衡型核苷转运蛋白1(hENT1)的表达,观察hENT1下调后5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌Panc-1细胞的毒性改变情况。方法:设计并合成能表达特异性针对hENT1的shRNA(smallhairpinRNA)的DNA序列,构建pSilence-hENT14.1-CMVneo质粒。用脂质体法将pSilence-hENT14.1-CMVneo质粒转染胰腺癌Panc-1细胞,并以含G418(600μg/mL)的培养液筛选阳性转染细胞(pSilence-hENT14.1-CMVneoPanc-1)。RT-PCR检测下调pSilence-hENT14.1-CMVneoPanc-1细胞hENT1mRNA表达的效果及稳定性。MTT法检测细胞在含5-FU(0～1.56×106nmol/L)的培养液中48h后的生存率,并计算IC50。结果:测序显示重组质粒pSilence-hENT14.1-CMVneo中插入片段序列正确。RT-PCR结果显示,pSilence-hENT14.1-CMVneoPanc-1细胞hENT1mRNA表达水平下调,并在两个月内(共传代15次)保持相对稳定。MTT结果显示,pSilence-hENT14.1-CMVneoPanc-1细胞组氟尿嘧啶的IC50显著下降,为Panc-1细胞组IC50的51.52%(P<0.01)。结论:用RNAi方法下调hENT1mRNA表达可增强5-FU对胰腺癌细胞的毒性。